β-伴大豆球蛋白α-亚基核心区的基因克隆、表达及纯化

摘要

利用 RT-PCR技术获得了齐黄 34 大豆种子的全长cDNA,采用自行设计的引物对目的基因αc进行扩增,并将目的基因与载体连接,构建了重组克隆载体 pGEM-αc.重组克隆载体经 Xho Ⅰ/EcoR Ⅰ双限制酶酶切鉴定后,与载体 pET-28a连接构建重组质粒 pET-28a-αc,经菌落PCR、双限制酶酶切及测序判定准确后,将其转入到感受态细胞E.coli BL2 1(DE3)中,当诱导温度为 3 7 ℃、菌液OD 600 nm值为 0.8、诱导剂(IPTG)浓度为 0.2 mmol/L,诱导时间为 9 h 时,重组α-亚基核心区蛋白分子质量为50 kU;工程菌 pET-28a-αc-BL21 经超声破裂、低温离心后,上清液利用镍离子亲和层析色谱柱经 AKTA 蛋白纯化系统纯化可以获得较高纯度的目的蛋白.