牡蛎过敏原肌浆钙结合蛋白的分离纯化和鉴定

摘要

利用质谱鉴定从太平洋牡蛎肌浆里提取的单一蛋白,通过免疫印迹分析诱导表达的重组蛋白和之前已鉴定的天然蛋白的分子质量一致性,利用圆二色光谱分析两蛋白在二级结构上的一致性,鉴定牡蛎肌浆钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein,SCP)糖蛋白类型并测定其多糖含量.结果表明,从牡蛎粗提物中纯化20 kDa蛋白,经LC-MS/MS证实为牡蛎肌浆钙结合蛋白SCP;电泳得到天然SCP和重组SCP分别为20 kDa和22 kDa的条带;测定二者 α螺旋和β折叠含量分别为13.5％、18.9％以及14.5％、18.2％;SCP蛋白含O-糖苷键型糖多糖,含量为7.89％.重组SCP与天然SCP除分子质量稍有差异外,二者空间结构近乎相同,是太平洋牡蛎中新型潜在致敏原.该研究为今后用重组SCP替代天然SCP进行致敏性和致敏机制研究奠定了基础.