甲酸脱氢酶基因在大肠杆菌Rosetta中的高效表达

摘要

甲酸脱氢酶是氧化还原酶辅酶NAD(P)+和NAD(P)H再生循环体系中的关键酶.实验中,用PCR方法扩增了假丝酵母Candida boidinii中甲酸脱氢酶基因(fdh),分别构建了诱导型表达载体pUC-fdh和pETfdh,以E.coli Rosetta为表达宿主,获得了能够高效表达甲酸脱氢酶的重组菌.经诱导后重组菌Rosetta/pETfdh的FDH比酶活为0.399U/mg(蛋白),Rosetta/pUC-fdh的FDH比酶活为0.163U/mg(蛋白).经SDS-PAGE分析,Rosetta/pET-fdh和Rosetta/pUC-fdh表达的FDH蛋白分别占菌体可溶性总蛋白的17%和10%,实现了fdh基因在Rosetta中的高效表达.研究中所构建的重组菌为氧化还原反应中的辅酶再生奠定了良好的基础.