干扰SET8调节血管平滑肌细胞增殖、凋亡促进血管钙化

摘要

背景与目的 血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡在许多血管钙化疾病的病理过程中起关键作用。近期研究表明,赖氨酸甲基转移酶SET8参与调节细胞增殖、凋亡过程。文章旨在探寻SET8是否通过调节VSMC增殖、凋亡而影响血管钙化。 方法 体外培养原代大鼠VSMC,将VSMC随机分为正常对照组、空质粒组和SET8-shRNA组。以脂质体LipofectamineTM2000为载体,转染VSMC。采用茜素红染色法和钙含量测定法判断细胞钙化程度；采用MTT法检测三组细胞的增殖能力；实时荧光定量PCR、Western blot法检测三组细胞中增殖基因Survivin和凋亡基因Caspase-3的表达水平,分析干扰SET8对VSMC增殖、凋亡及其相关基因和蛋白表达的影响。 结果 ①干扰SET8可成功抑制VSMC中SET8蛋白的表达（P〈0.05）。②转染VSMC后,与正常对照组和空质粒组比较,SET8-shRNA组钙含量明显升高（P〈0.05）。③MTT结果显示,在第12 h、24 h、36 h、48 h,SET8-shRNA组VSMC的增殖能力较正常对照组和空质粒组明显降低（P〈0.05）。④实时荧光定量PCR和Western blot结果显示SET8-shRNA组Survivin的mRNA和蛋白表达较正常对照组和空质粒组明显下降,而Caspase-3的mRNA和蛋白表达则相反（P〈0.05）。 结论 干扰SET8能够增加促凋亡基因表达,抑制增殖基因表达,SET8有可能参与调节大鼠血管钙化。