高磷通过SET8调控p53/Bcl-2/Caspase信号通路促进血管平滑肌细胞钙化

摘要

cqvip:目的探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET8在高磷诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化中的作用及机制。方法选取80~100g的清洁雄性SD大鼠6只,取其胸主动脉,分离VSMCs后进行原代培养。VSMCs传至第3~ 4代,铺6孔板,并给予相应刺激。将VSMCs随机分为正常组和高磷组(10mmol/Lβ-甘油磷酸),培养4d后茜素红染色观察钙结节形成情况,甲基麝香草酚蓝比色法钙含量,流式细胞数检测细胞凋亡,RT-PCR和Westernblot检测SET8、 p53、 Bcl-2、 Bax、Caspase3的mRNA和蛋白的表达水平。之后用脂质体将SET8-shRNA质粒与NS-shRNA转染VSMCs作为SET8-shRNA组和空质粒组,未转染组作为正常对照组,RT-PCR和Westernblot检测p53、 Bcl-2、 Bax、Caspase3的mRNA和蛋白的表达水平。结果(1)高磷组钙盐沉积较正常组明显增加(P<0.05)。( 2)流式细胞仪检测结果显示,与正常组相比,高磷组VSMCs的细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。( 3)与正常组相比,高磷组Bcl-2、 SET8的mRNA和蛋白表达水平下降;p53、 Bax、Caspase3的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0 .05)。( 4)干扰SET8基因表达后钙盐沉积增加(P<0.05), Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平下降;p53、 Bax、Caspase3的mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论高磷通过SET8调控p53/Bcl-2/Caspase信号通路,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,上调促凋亡蛋白Bax和Caspase3的表达,进而参与调控VSMCs的钙化。