构建IL-4启动子区报告基因载体探讨甲基化对其启动子调控活性的影响

摘要

目的白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)在特应性皮炎等疾病的发病机制中发挥着关键的作用,但其基因甲基化改变与疾病相关性尚不明确。本研究通过构建荧光素报告基因载体,检测DNA甲基化对于IL-4基因启动子转录活性的影响。方法以Jurkat细胞基因组DNA为模板,PCR扩增IL-4启动子调控序列片段,连接入克隆载体psi CHECK荧光素报告载体。采用补丁甲基化(patch methylation)技术,在体外对IL-4启动子基因片段进行甲基化处理,构建甲基化IL-4启动子报告基因载体。采用电穿孔转染技术,将psi CHECK-IL-4-promoter荧光素报告载体转染至Jurkat细胞,对甲基化和未甲基化载体的荧光素酶进行检测,比较其对IL-4基因转录水平的影响。结果琼脂糖凝胶电泳证实获得了IL-4启动子区域基因序列,测序结果与Genbank中一致,成功构建了IL-4启动序列及其甲基化的psi CHECK-IL-4-promoter荧光素酶报告基因载体。经检测,甲基化报告基因载体的转录活性较未甲基化载体明显降低,相对比例为0.43∶1。结论 IL-4启动子序列低甲基化可导致其转录活性升高,上调IL-4表达水平。