人核心结合因子基因P2启动子区报告基因载体的构建及鉴定

摘要

目的构建含核心结合因子（RUNX2）基因P2启动子区的荧光素酶报告基因载体,在人主动脉瓣瓣膜间质细胞中检测其活性,并观察骨形态发生蛋白-7（BMP-7）对RUNX2启动子活性的影响。方法以人基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应（PCR）技术扩增人RUNX2基因P2启动子区域,扩增产物经Kpn I和Nhe I双酶切后插入到pGL3-Basic中,重组质粒pGL3-RUNX2-P2经测序正确后转染人主动脉瓣瓣膜间质细胞,并以BMP-7处理细胞,检测荧光素酶活性变化。结果将RUNX2基因P2启动子区域1.5 kbp大小基因片段克隆入pGL3-Basic中,测序结果表明序列正确。转染pGL3-RUNX2-P2的瓣膜间质细胞中荧光素酶活性较转染空载体pGL3-Basic组明显增加（0.273±0.032比0.028±0.005,P＜0.05）。BMP-7可增强RUNX2启动活性（0.474±0.059比0.273±0.032,P＜0.05）。结论成功构建含有人RUNX2基因P2启动子区的荧光素酶报告基因载体,BMP-7可通过增强RUNX2启动子活性调控其表达。