小干扰RNA表达载体介导的EOLA1基因表达抑制研究

摘要

目的　设计和构建EOLA1基因特异性的小干扰RNA质粒 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法　将靶点特异性的寡核苷酸连接到经ApaⅠ EcoRⅠ酶切线性化的pBS/U6质粒 ,测序验证 ,阳性重组质粒转染ECV3 0 4细胞 ,半定量RT PCR方法检测靶基因的表达 ,阳性重组质粒与pEGFP EOLA1共转染 ,观察外源报告基因绿色荧光蛋白的表达。结果　构建的阳性重组质粒转染能够抑制靶基因EOLA1mRNA的表达 ,并能够显著抑制EOLA1 EGFP融合蛋白的表达。结论　成功构建了针对EOLA1基因的siRNA质粒 ,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。