siRNA表达载体介导的RNA干扰对肝癌细胞周期蛋白E1表达抑制研究

摘要

目的探讨经载体介导的RNA干扰对肝癌细胞周期蛋白E1表达抑制效率.方法针对周期蛋白E1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pSilencer 1.0-U6载体上构建siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入BEL-7402肝癌细胞株.RT-PCR分析周期蛋白E1表达抑制率;流式细胞术测细胞周期S期和凋亡细胞比率;MTT比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线.结果重组载体介导肝癌细胞BEL-7402周期蛋白E1抑制率达62%;转染重组质粒32 h测得S期细胞为19%,空载体转染对照为27%;转染重组质粒96 h流式细胞术测得凋亡细胞为13.1%,高于空载体对照的6.6%;细胞生长曲线作图表明,重组载体转染组细胞生长明显减缓.结论肝癌细胞周期蛋白E1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰成功抑制,进而导致细胞生长受抑并诱导凋亡;本研究为探索肝癌的RNAi治疗提供了初步的实验依据.