Mayven不同截短体原核表达载体的构建、表达和纯化

摘要

为了探索Mayven蛋白的功能,进一步研究多发性硬化症的发病机制,我们通过PCR扩增得到Mayven4个不同长度的基因片段,包括片段P1(1-902 bp)、片段P2(1-523 bp)、片段P3(507-182 bp)和片段P4(887-1782bp),将这些片段克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌BL21,并用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE及western blot方法分析,采用GST蛋白纯化系统对融合蛋白进行纯化。实验结果显示我们成功构建了4个包含不同截短体的重组融合表达质粒GST-Mayven(P1、P2、P3、P4),诱导后表达得到4个截短体的Mayven融合蛋白,其表达形式均为可溶性表达,其相对分子质量与预期相符,纯化后得到各自的目的蛋白,为后续的Mayven蛋白的功能研究奠定了基础。