癌钙调蛋白／鱼精蛋白截短体融合基因在原核表达载体中的构建及鉴定

摘要

目的在原核表达载体中构建癌钙调蛋白(OM)/鱼精蛋白截短体(tp)融合基因,进行基因测序鉴定。方法提取SD大鼠腹腔巨噬细胞,并进行细胞计数,经巨噬细胞特异性抗体CD68鉴定。设计引物扩增OM基因,并在其3’端引入tp的编码基因,经PCR扩增获得OM/tp融合基因,通过中间载体PUC57进行目的基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体PET32a连接,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,小量提取质粒,送样经公司测序鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳获得OM/tp目的基因,与预期的目的基因大小一致,回收目的基因与中间载体PUC57连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致。抽提质粒PUC57-OM/tp,经测序鉴定后与预期的序列一致。质粒PUC57-OM/tp酶切后与载体PET32a连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致。抽提质粒PET32a-OM/tp经测序后与预期的序列一致。结论 OM/tp融合基因的成功构建,为该融合蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础。