一种人神经丝轻链的原核表达载体构建及蛋白的纯化方法

摘要

本发明公开了一种人神经丝轻链的原核表达载体构建及蛋白的纯化方法，通过基因合成技术将重组NEFL密码子优化后亚克隆至pET‑22b(+)，pET‑32a(+)和pSmart‑I中，构建重NEFL质粒；利用构建好的重NEFL质粒制备表达载体转化表达菌感受态细胞；利用菌落SDS‑PAGE方法，鉴定目的蛋白是否在大肠杆菌中大量表达；再根据SDS‑PAGE结果，判断目的蛋白是以包涵体还是以可溶性蛋白的形式产生，确定最适的上清表达诱导条件；最后纯化目的蛋白并将纯化后的目的蛋白进行透析、浓缩；本发明对基因进行密码子优化，运用不同的表达载体，进行了最优克隆的筛选及最优表达时间的优化，提高了该蛋白的上清表达量。