乙型肝炎病毒DNA转染细胞的一种内参标准:真核细胞报告基因SEAP

摘要

目的建立用真核细胞报告基因ＳＥＡＰ转染人肝癌细胞系（Ｈｕｈ７、ＨｅｐＧ２）及鸡肝癌细胞系（ＬＭＨ）的表达系统，供研究ＨＢＶ基因功能应用。方法分别将带有分泌性碱性磷酸酶（ＳＥＡＰ）报告基因的ｐＢＣ１２／ＰＬ／ＳＥＡＰ及ｐＢＣ１２／ＣＭＶ／ＳＥＡＰ质粒ＤＮＡ转染Ｈｕｈ７、ＨｅｐＧ２及ＬＭＨ细胞，并用ｐＢＣ１２／ＣＭＶ／ＳＥＡＰ质粒ＤＮＡ与Ｓ基因区变异体的克隆ＨＢＶＤＮＡ共转染ＨｅｐＧ２细胞。培养后收取细胞培养液，用ＥＬＩＳＡ法测定ＳＥＡＰ活性及ＨＢｓＡｇ。结果在三种细胞中ｐＢＣ１２／ＣＭＶ／ＳＥＡＰ均可表达，以７２小时表达的酶活性测定最为适宜；而ｐＢＣ１２／ＰＬ／ＳＥＡＰ表达仅处于低水平。以ＳＥＡＰ表达量作为内参对ＨＢｓＡｇ的表达量进行比较，发现Ｓ基因１２９Ｌ变异体表达ＨＢｓＡｇ量显著高于野毒株。结论ＳＥＡＰ作为内参具有快速简便，不需同位素及特殊仪器的优点，有较高的实用价值。