建立标准化SEAP报告基因系统的研究

摘要

通过建立SEAP(分泌性碱性磷酸酶)产物的标准曲线,得出SEAP的吸光值与酶活力、蛋白质绝对值之间相互换算的公式,从酶动力常数、酶反应时间、不同量mRNA与酶吸光值之间的对应关系等方面进行研究.建立了在405 nm波长处,SEAP的吸光值与酶活力之间、酶活力和蛋白质绝对值之间相互换算的两个公式:y(酶活力)=(x(吸光值)+0.002 8)/19.13×10;1U(酶活力)=5.035 ng(蛋白质绝对量),并在细胞和小鼠实验中得到了验证.建立了提高SEAP检测系统灵敏度的方法,并进行了导入目的基因不同方法的效率之间的比较.结果表明,建立的换算标准可以使SEAP报告基因系统从定性水平上升到定量水平,而且灵敏度可以达到10-18mol的标准.