建立基于荧光素报告基因系统检测雌激素样物质方法的研究

摘要

目的 建立基于报告基因的HeLa细胞体外雌激素样物质检测方法.方法 分别构建含有人雌激素hER α和hER β编码序列的表达质粒以及人雌激素反应元件(estrogen response elements,ERE)调控的荧光素报告质粒,用脂质体将hER α、ERE质粒或hER β、ERE质粒共转染HeLa细胞,用雌二醇(E2)处理后检测报告基因荧光素酶的活性.结果构建了pER α_(neo)和pER β_(neo)质粒以及ERE调控的荧光素酶报告质粒pGL3-ERE-Luc,共转染质粒pERE4-Luc和pER α_(neo)或pERE4-Luchygro和pEP α_(neo)到HeLa细胞株后,建立稳定表迭ERE-Luc的hER α/hEP βHeLa细胞株,实验证实报告基因的表达与E2呈明显的剂量反应关系,ERα和ERβ的EC50分别为9.2×10~(-11)mol/L和2.5×10~(-10)mol/L.结论 基于荧光素酶报告基因的体外雌激素样物质检测方法有效可靠.