基于荧光素酶报告基因的CHO细胞(抗)雄激素样物质检测方法的建立

摘要

目的　建立基于报告基因的CHO细胞体外(抗)雄激素检测系统,并研究2 ,4 DDT、甲氧氯的抗雄激素样作用。方法　通过脂质体转染法将人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV Luc及内对照质粒phRL SV4 0瞬时转入CHO细胞,检测报告基因lucferase的表达,给予DHT、FLU后检测该系统的有效性和特异性,并用2 ,4 DDT、METH等受试物进行验证。结果　转染后的CHO细胞对DHT呈明显的剂量-反应关系,1×10 - 1 0 mol LDHT可出现明显的兴奋效应,至1×10 - 7mol L可达到最大反应值,而未转染雄激素受体质粒与DHT无明显反应,FLU可以显著抑制二氢睾酮的激动效应,说明检测系统有效、特异。验证结果表明3×10 - 7mol L以上2 ,4 DDT及3×10 - 7mol L以上METH可对雄激素受体活性产生抑制作用,2 ,4 DDT的抑制作用强于甲氧氯。结论　本试验建立的基于报告基因的体外(抗)雄激素检测系统是可行的,2 ,4 DDT、甲氧氯有明显的抗雄激素活性作用。