人神经前体细胞多巴胺D_2受体在体外和移植入脊髓后的表达

摘要

目的:检测人神经前体细胞多巴胺D2受体在体外和移植入脊髓后的表达。方法:实验于2003-09/2005-01在北京大学干细胞研究中心完成。培养人神经前体细胞系hNPC-TERT细胞,进行反转录-聚合酶链反应、放射性配基结合实验。选择健康成年雌性新西兰兔10只,随机分为移植hNPC-TERT细胞组和移植Hela细胞组,各5只。采用免疫荧光染色检测hNPC-TERT多巴胺D2受体在体外和移植于兔正常脊髓后的表达。结果:纳入动物10只,均进入结果分析。①反转录-聚合酶链反应:体外培养hNPC-TERT细胞表达D2受体mRNA,而Hela细胞不表达D2受体mRNA。②放射性配基结合分析:Raclopride与hNPC-TERT细胞D2受体结合的平衡解离常数为(1.52±0.16)nmol/L,最大结合位点为(80346±4306)个/细胞,D2受体在hNPC-TERT细胞的浓度为(13.34±0.34)pmol/L。③免疫荧光染色:D2受体在体外培养的hNPC-TERT细胞免疫荧光染色显示有D2受体蛋白表达,而Hela细胞无D2受体蛋白表达。D2受体在脊髓内移植hNPC-TERT细胞免疫荧光染色显示,移植后2d,hNPC-TERT细胞移植组可见人特异核和D2受体双标阳性染色细胞,表明脊髓内移植的hNPC-TERT细胞表达D2受体,低倍荧光显微镜下观察人特异核抗原染色分布,移植部位hNPC-TERT细胞(人特异核染色阳性细胞)未见明显迁移。Hela细胞移植组,人特异核抗原染色阳性细胞D2受体染色阴性,表明脊髓内移植的Hela细胞不表达D2受体。结论:体外培养和脊髓内移植2d的hNPC-TERT表达D2受体。D2受体是核素显像示踪脊髓内移植hNPC-TERT细胞可能的候选靶点,而放射性标记的Raclopride是可选择的示踪剂。