克罗诺阪崎肠杆菌微滴数字PCR定量方法的建立

摘要

为建立克罗诺阪崎肠杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对克罗诺阪崎肠杆菌的特异性单拷贝PapC基因设计引物探针,进行特异性、灵敏度和重复性实验,本文通过对纯菌液进行检测,比较平板计数法、实时PCR和ddPCR方法的定值效果。结果表明,所建立的克罗诺阪崎肠杆菌ddPCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。克罗诺阪崎肠杆菌纯菌液中最低定量限为104 CFU/mL,最低检出限为16 CFU/mL。不同浓度的纯菌液的测定,ddPCR与平板计数的测定值结果偏差小于10%,比实时PCR方法的定值结果更加准确。因此,本研究建立的ddPCR方法能够快速、准确、灵敏、特异地定量检测克罗诺阪崎肠杆菌。