Nrf2信号通路在锰致TM3细胞氧化损伤中的作用

摘要

目的 在锰所导致TM3细胞毒性中,探究锰是否介导Nrf2信号通路调控发挥抗氧化损伤的作用.方法 染锰剂量设置低(100μmol/L)、中(200μmol/L)、高(300μmol/L)剂量,染锰时间均为24 h.该实验抑制剂为ATRA,激动剂为TB-HQ,终浓度10μmol/L.采用倒置相差显微镜观察TM3细胞形态,MTT法测细胞活力AnnnexinV/PI双染色法测凋亡率,DCFH-DA探针测ROS水平,TBA法测细胞内MDA含量,Western blot及RT-qPCR技术测细胞内Nrf2、HO-1、GSTpi、SOD、NQO1等蛋白和基因的表达.结果 TM3细胞的染锰IC50为300μmol/L.随着染锰剂量的增加,细胞存活率降低,且在一定剂量范围内,染锰浓度越高,ROS、MDA产生越多.锰中毒可导致TM3细胞中氧化应激相关蛋白HO-1、NQO1、SOD、GSTpi及Nrf2蛋白表达降低,从而引起细胞氧化损伤.Western Blot及RT-qPCR技术所得结果显示一致,均表明,Nrf2被抑制后,在低中高剂量组中,ROS生成有一定增高,具有剂量效应关系,反之当Nrf2被激活后,ROS、MDA生成有一定降低,也具有剂量效应关系.结论 采用MTT实验,Western blot等3种方法观察不同剂量Mn对TM3细胞的影响,3种结果均一致,即在一定剂量范围内,随染锰浓度增加,细胞损伤亦增加.且在同一染锰浓度下,经ATRA预处理后的细胞损伤程度更大,经TBHQ预处理后的细胞损伤程度减轻,提示锰可诱导TM3细胞氧化损伤,且Nrf2信号通路在TM3细胞中具有一定抗氧化作用.