可溶型HLA-G5～-G7分子的克隆表达及对NK细胞杀伤功能的影响

摘要

通过基因克隆及转染,建立分别稳定表达HLA-G5、-G6及HLA-G7抗原的人绒癌JAR细胞株,探讨可溶型HLA-G5^-G7异构体的表达及对NK细胞杀伤功能的影响。采用RT-PCR、流式细胞术、Western blot及免疫细胞化学法分析、鉴定转染细胞中HLA-G的mRNA及蛋白表达。LDH释放法检测HLA-G5、-G6及HLA-G7表达对NK细胞杀伤活性的影响。RT-PCR及免疫细胞化学结果显示,HLA-G5^-G7/pVITRO2-mcs重组质粒成功转染HLA-G表达阴性的人绒癌JAR细胞株。FACS分析显示HLA-G5、-G6抗原在JAR-HLA-G5、-G6细胞胞浆内表达。Western blot分析显示可溶性HLA-G5抗原能成功分泌至细胞外。体外杀伤实验发现可溶型HLA-G5抗原能抑制NK细胞的杀伤活性(P<0.05)。本研究结果提示,HLA-G5具有分泌到细胞外的特性,且能有效抑制NK细胞的杀伤活性,但HLA-G6、-G7主要在细胞内表达,其生物学功能有待进一步鉴定。