CCK-8法与FACS对抗CD3抗体诱导小鼠Treg细胞免疫抑制作用的比较

摘要

用非放射性同位素方法检测抗CD3抗体诱导的小鼠调节性T细胞(Treg)对效应性T细胞(Teff)增殖的抑制作用。本实验用丝裂霉素C处理脾细胞获得抗原递呈细胞(APC),用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4^+CD25^+的Treg和CD4^+CD25^-的Teff,二者按1:2比例与APC共培养,并加入anti-CD3抗体刺激3 d,加CCK-8孵育检测细胞增殖。另外,CFSE标记Teff,与Treg共同培养,加入anti-CD3抗体刺激3 d,流式细胞仪分析Treg对Teff增殖的抑制作用。流式分析表明,0.1 mg/L、1 mg/L的anti-CD3抗体均能明显促进Teff细胞增殖,加Treg细胞能明显减低细胞增殖的比例和减少增殖的代数。anti-CD3抗体剂量增加到1 mg/L,Teff的增殖较0.1 mg/L剂量刺激时没有明显改变,但Treg的抑制功能减弱了。CCK-8法与流式检测得出的结果一致。CCK-8法和流式细胞术(FACS)均可以用来检测Treg细胞的免疫抑制作用,并且采用0.1 mg/L anti-CD3抗体刺激,对Treg细胞免疫抑制作用的检测效果更好。