大鼠脂肪因子Vaspin基因的克隆与原核表达

摘要

目的构建大鼠脂肪因子Vaspin高效原核表达载体,并获得纯化的Vaspin蛋白。方法以大鼠睾丸脂肪细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增Vaspin基因,亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)获得重组质粒pET-30a-Vaspin,转化至E.coli BL21(DE3)菌株中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测表达产物,用Ni柱进行纯化重组蛋白,Western blot鉴定其特异性。结果测序结果表明克隆的Vaspin基因序列正确,构建的原核表达载体可以成功表达分子量为50 kDa的重组蛋白,Western blot结果证实该蛋白为大鼠脂肪因子Vaspin。结论完成了大鼠脂肪因子Vaspin基因的克隆,成功构建了原核表达载体,并在BL21(DE3)菌株中高表达,为进一步研究Vaspin在胰岛素抵抗及肥胖中的作用机制奠定了基础。