杨树MADS转录因子SVL基因克隆、原核表达与多克隆抗体制备

摘要

为研究杨树MADS转录因子相关基因在逆境中的作用,以84K杨树叶片的cDNA为模板,通过PCR扩增得到了开放阅读框为684 bp、氨基酸个数为227的PtSVL基因;构建原核表达载体pET-B2M-PtSVL-3×FLAG,并在大肠杆菌B21(DH3)中大量表达。结果表明,获得的PtSVL-3×FLAG融合蛋白,大小为42.0 ku,主要以包涵体形式存在;用纯化后的蛋白免疫新西兰公兔制备PtSVL多克隆抗体;间接ELISA法和Western blot检测后多克隆抗体后显示其效价高,特异性好。获得的PtSVL多克隆抗体将为后续鉴定PtSVL蛋白的互作蛋白提供基础。