编码蚯蚓纤溶酶组分A基因的cDNA克隆及表达

摘要

蚯蚓纤溶酶组分A是赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)体内纤溶酶的主要组分之一,具有双重纤溶活性.用逆转录PCR(RT-PCR)的方法从赤子爱胜蚓中克隆了编码蚯蚓纤溶酶组分A的cDNA,由其推测的氨基酸序列与丝氨酸蛋白酶类胰蛋白酶家族的成员具有较高的同源性,而且具有其保守的催化位点,表明该蛋白质可能是胰蛋白酶家族的成员.将上述cDNA导入大肠杆菌的表达载体pQE31和pMAL-c2x,构建表达质粒pQE-efea和pMAL-efea,这2个表达质粒均可以在大肠杆菌菌株M15中诱导表达出与预期大小相近的重组蛋白.其中,pQE-efea表达的His6-EFEa主要以包涵体形式存在,而pMAL-efea表达的重组蛋白MBP-EFEa是可溶性的,并且具有纤溶活性.