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第1章 序言
1.1蚯蚓
1.2血栓病
1.3蚯蚓纤溶酶
1.4 EFE的生化制备组分
1.5 EFE基因的研究
1.6 EFE基因表达
1.7论文背景、思路及技术路线
1.7.1本实验室前期工作基础
1.7.2本研究的目的和意义
1.7.3研究所用的表达载体的特点
1.7.4技术路线
第2章 蚯蚓纤溶酶序列多态性分析
2.1材料和方法
2.1.1生物信息学软件、数据库和网址
2.1.2方法
2.2实验结果
2.2.1核酸序列信息收集和分析
2.2.2电子克隆结果与分析
2.3讨论
2.3.1核酸序列多态性
2.3.2蛋白质多态性
2.3.3 P-Ⅱ组电子克隆的问题
第3章 蚯蚓纤溶酶P-Ⅲ组分序列分析
3.1主要实验材料
3.1.1实验材料和试剂
3.1.2配制试剂
3.1.3主要实验仪器
3.2实验方法
3.2.1 P-Ⅲ基因分析
3.2.2蚯蚓Efp-Ⅲ-2基因片断的制备
3.2.3 P-Ⅲ质粒文库的构建
3.2.4质粒文库的筛选与鉴定
3.2.5 Efp-Ⅲ-2基因的序列测定
3.3实验结果
3.3.1 P-Ⅲ组分序列分析结果
3.3.2蚯蚓Efp-Ⅲ-2基因片断的制备
3.3.3 P-Ⅲ质粒文库的构建
3.3.4 P-Ⅲ质粒文库的筛选
3.3.5测序结果和分析
3.4讨论
3.4.1 P-Ⅲ核酸序列多态性问题
3.4.2蚓种与多态性的问题
第4章 EFE基因克隆表达产物的活性分析
4.1主要实验材料
4.1.1实验材料和试剂
4.1.2配制试剂
4.1.3主要实验仪器
4.1.4使用的质粒
4.2实验方法
4.2.1感受态细菌的制备
4.2.2感受态细菌的转化
4.2.3菌落PCR检验阳性克隆
4.2.4重组EFE的诱导表达与纯化
4.3实验结果
4.3.1 EFE蛋白的诱导表达
4.3.2 EFE蛋白的诱导表达产物的纯化
4.3.3蛋白质含量测定
4.3.4酪蛋白平板
4.3.5纤维蛋白平板
4.3.6底物电泳
4.4讨论
4.4.1 P-Ⅲ组分活性的问题
4.4.2四组分克隆表达产物的活性大小问题
结论
参考文献
致谢