蚯蚓纤溶酶7#组分基因在甲醇酵母中的克隆与表达

摘要

为了使蚯蚓纤溶酶(EFE)最佳活性组分EFE_7#基因在甲醇酵母(Pichiapastoris)中获得表达,构建了表达载体pPIC9K_EFE,通过对电击条件的优化,转化率达到5×103个/μgDNA.为了便于筛选阳性克隆,以该基因的原核表达产物为抗原免疫动物,获得了与天然EFE_7#组分具有相同免疫特异性的抗体.用该抗体为探针对上述转化子进行筛选,得到了上百株阳性重组子.RT_PCR和westernblotting证明,EFE_7#基因在这些重组子中获得了表达,表达产物相对分子质量高于天然产物.