巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线检测奶粉中的结核分枝杆菌

摘要

目的建立一种PCR方法检测市售奶粉中是否存在结核分枝杆菌及其亚型。方法根据人型及牛型结核分枝杆菌硝酸还原酶基因启动子区215位上T-C的转换,以卡介苗菌液、人型结核分枝杆菌标准株(H37Ra)、人型/牛型临床分离株与奶粉混悬液混合物为标本,与商品化结核分枝杆菌基因荧光PCR定量试剂对比,设计建立巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线方法检测结核分枝杆菌及其亚型,并调查20种60批次品牌市售奶粉中是否存在结核分枝杆菌及其亚型。结果巢式荧光PCR特异性地检出结核分枝杆菌nar GHJI基因,其敏感性比荧光定量PCR可高1个数量级;人型及牛型结核分枝杆菌nar GHJI基因PCR产物的高分辨熔链温度分别为83.08℃±0.08℃和83.96℃±0.09℃,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功建立巢式荧光PCR结合高分辨熔链曲线方法敏感、特异地检测分析结核分枝杆菌及其人型或牛型亚型,在调查的20种60批次奶粉中未检出结核分枝杆菌。