重组酶等温扩增技术监测采供血环境中致病菌的应用研究

摘要

目的采用快速重组酶介导的等温扩增技术(RAA)监测血站采供血过程中的致病菌—金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌。方法制备10 cfu/ml^104 cfu/ml系列浓度的2种致病菌标准菌株悬液,分别加入核酸快速裂解液中,加热提取DNA,加RAA荧光型检测试剂在小型Genchek荧光检测仪内37℃条件下识别并扩增细菌特异基因片段,20 min内实时读取荧光检测值判定结果。检测8个标准菌株验证其特异性,采用形态学-生化法和RAA法分别对8个标准菌株和86份采供血环境工艺卫生样本进行检测。结果RAA法对2种致病菌的最低检出限均为102 cfu/ml,与其他细菌无交叉反应,对采供血过程中的工艺卫生样本的检测结果与形态学-生化法相同。结论RAA技术无需分离即可快速、灵敏、特异性地检测金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌,操作快速简便,对实验人员无特殊要求,可用于采供血环境中的致病菌的监测。