瞬时受体电位阳离子通道蛋白6高表达对转化生长因子-β1诱导体外培养小鼠肾足细胞损伤的作用

摘要

目的 探讨瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)高表达对转化生长因子-β1(TGF-β1)干预下体外培养小鼠肾足细胞nephrin、desmin、caspase9表达及细胞凋亡的影响.方法 用脂质体Lip2000将针对小鼠TRPC6的基因真核表达载体pEX-3-TRPC6转染体外培养的小鼠足细胞,48小时后Western blot检测转染后TRPC6蛋白表达变化.将足细胞分为4组:正常对照组,TGF-β1干预组,TGF-β1 +pEX-3-NC组(空载体组),TGF-β1 +pEX-3-TRPC6组(TRPC6高表达组),干预48小时后用western blot和real time PCR检测caspase9、desmin、nephrin蛋白和mRNA表达水平,用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,DAPI染色观察凋亡细胞核形态学变化.结果 转染48小时后TRPC6高表达组TRPC6蛋白水平较正常对照组明显升高(P＜0.01),空载体组TRPC6蛋白表达水平无明显变化;TGF-β1干预48小时后caspase9、desmin蛋白和mRNA表达水平显著升高(P＜0.05),nephrin蛋白和mRNA表达水平明显下降(P＜0.01),使TRPC6高表达后上述变化更明显(P＜0.05);TGF-β1干预后足细胞凋亡增多并出现典型凋亡细胞核形态学改变,TGF-β1干预组足细胞凋亡率为(12.30±0.81)％,TRPC6高表达组凋亡率为(21.26±1.16)％,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01),空载体组细胞凋亡率与TGF-β1干预组比较无明显差异.结论 TRPC6在TGF-β1诱导足细胞损伤中发挥重要作用,其机制之一可能通过线粒体凋亡途径诱导足细胞凋亡,减少nephrin表达,增加desmin表达来实现.