胶原夹心培养大鼠肝细胞及其细胞色素P450酶活性的测定

摘要

目的自制大鼠尾腱Ⅰ型胶原培养原代大鼠肝细胞,测定肝细胞中细胞色素P450(cytochrome P450, CYP)酶活性.方法制备无菌大鼠尾腱Ⅰ型胶原,比较单层胶原铺底法(collagen coated, CC)及胶原夹心法(collagen sandwich system, CSS)培养大鼠肝细胞的生长及功能维持情况.CSS法培养肝细胞,分别加入泼尼松龙(100 μmol·L-1,3 d)、尼莫地平(50 μmol·L-1,2 d)和利福平(50 μmol·L-1,2 d),测定CYP1A、CYP2E1及CYP3A酶活性.结果 CSS法培养6 d后,肝细胞生长良好.CC法培养3 d后细胞开始脱落,此后持续增多;6 d后,培养上清液中ALT、AST与LDH活性升高,均高于同期CSS法培养细胞上清液中的水平.加入经CYP3A代谢药物,CSS培养肝细胞CYP1A活性无明显改变;尼莫地平使CYP3A活性升高33%,而CYP2E1活性下降45%(P<0.05);利福平使CYP3A活性升高为对照组的1.94倍(P<0.05),对CYP2E1活性无作用.结论同为CYP3A底物,泼尼松龙、尼莫地平和利福平对CYP亚型的影响不同,但不改变肝细胞CYP1A对致癌物的活化.CSS培养法可作为体外模型用于药物代谢研究.