醋柴胡小分子水溶性部位抑制HEK293-Pgp细胞中P糖蛋白的外排功能

摘要

目的 观察醋柴胡小分子水溶性部位(MHE)对P糖蛋白(Pgp)高表达的HEK293-Pgp细胞中Pgp的影响,分析其可能的分子机制.方法 实验分人胚肾细胞HEK 293和 Pgp高表达的HEK293-Pgp组.MTT法观察醋柴胡小分子水溶性部位对细胞增殖的影响;细胞分别加入秋水仙碱和罗丹明B作底物,Pgp蛋白摄取活性测定实验分别采用高效液相色谱(HPLC)法和流式细胞术(flow cytometry)检测胞内底物含量,以分析Pgp外排功能;采用Western blot法检测Pgp蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测Pgp mRNA水平.结果 50 g·L-1 MHE作用于细胞48 h后,HEK293细胞中的Pgp外排功能略呈上调趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);而作用于HEK293-Pgp细胞24 h后相应的蛋白表达以及mRNA水平分别降低了68.1%和38.8%(P＜0.05),且HEK293-Pgp细胞对罗丹明B的摄取率升高为对照组的3.2倍(P＜0.01),呈下调Pgp外排的功能.结论 MHE呈抑制Pgp高表达的细胞中Pgp外排功能的作用,这可能是通过下调Pgp mRNA和蛋白表达实现.初步暗示了MHE可能为一种潜在的Pgp抑制剂.