粪肠球菌ace阳性和阴性菌株体外生物被膜形成能力比较

摘要

目的 比较粪肠球菌ace基因阳性、阴性菌株的生物被膜形成能力,探讨粪肠球菌ace基因是否有利于细菌生物被膜的形成.方法 微量滴定板法检测46株临床分离粪肠球菌的生物膜形成能力,PCR方法检测其ace基因,比较生物膜阳性组、阴性组粪肠球菌ace基因检出率;将粪肠球菌ATCC29212(ace+)、野生株U8-ace-、空质粒对照株EU8-ace-、转化株ZU8-ace+接种到96孔板,培养3 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h,结晶紫染色,测定OD570,微量滴定板法比较ATCC29212(ace+)、U8-ace-、EU8-ace-以及ZU8-ace+的生物被膜形成能力;将ATCC29212 (ace+)、U8-ace-、EU8-ace-、ZU8-ace+在含盖玻片的细胞培养皿内培养6 h～72h,共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察比较ace+、ace-粪肠球菌形成的生物膜平均厚度和密度.结果 生物膜阳性组粪肠球菌ace基因检出率为76.67％,高于生物膜阴性组31.25％的检出率,差别有统计学意义(x2=9.04,P＞0.05);微量滴定板法显示不同时间点ATCC29212(ace+)以及转化株ZU8-ace+的OD570值都大于U8-ace-的OD570值,P＜0.01,而EU8-ace-与U8-ace-比较,OD570值无统计学差别,P＞0.05;CLSM观测的ace+粪肠球菌在不同阶段所形成的生物膜的平均厚度、密度均高于ace-粪肠球菌,P＜0.01,空质粒对照株与野生株比较,生物膜的厚度、密度无统计学差别,P＞0.05.结论 粪肠球菌胶原黏附素ace基因或有利于肠球菌生物被膜的形成.