脑膜炎大肠杆菌新基因cglE的克隆、表达及功能分析

摘要

目的研究脑膜炎大肠杆菌新基因cglE在细菌穿透血脑屏障中的作用.方法1)PCR扩增cglE基因片段,克隆到原核表达载体pET22b,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并对目的蛋白进行纯化及初步鉴定.2)应用生物信息学方法对cglE表达产物进行一级和二级结构预测.结果经Western-blot验证原核表达的CglE蛋白,SDS-PAGE电泳显示其分子量大小约50 000 Da.生物信息学分析表明,该基因与编码二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide Ddhydrogenase,DLDH)的基因有同源性,与脑膜炎大肠杆菌侵袭素IbeA在二级结构上有相似性.结论建立稳定的原核表达系统并成功表达cglE基因产物,cglE基因可能与能量代谢及细菌穿透血脑屏障有关.目的蛋白CglE的表达及初步鉴定可为研究其功能及脑膜炎大肠杆菌的感染组学奠定了良好的基础.