抗牛胰蛋白酶(TRY)抗体的制备和对杀虫剂抗性的初步检测

摘要

目的 制备抗牛胰蛋白酶(TRY)多克隆抗体检测杀虫剂抗性,为建立蚊媒菊酯类杀虫剂抗性的现场检测方法奠定基础.方法用牛TRY 配成200mg/mL的储备液,与弗氏完全佐剂等体积混合均匀后,按照每只BALB/c小鼠20μg的量背部皮下多点注射,每隔15d加强免疫1次.25d后尾部采血,用ELISA方法测定抗体滴度.45d后眼球采血分离血清,标记分装冷藏备用.用此抗体Western blot 研究抗性和敏感品系淡色库蚊成蚊粗提蛋白,观察显色结果.结果所得多克隆抗体小鼠抗牛TRY抗血清滴度达到1∶10 000,ELISA重复性稳定.在抗TRY抗血清组抗性品系出现约28kD大小的显色带.结论成功制备小鼠抗TRY多克隆IgG抗血清,其检测蚊虫抗性是可行的,值得进一步研究.