抗牛IFN-γ单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的初步建立

摘要

牛结核病(Bovine tuberculosis)是由牛型结核分枝杆菌(Mycobacteriumbovis,MB)和人型结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)所引起的一种人畜共患慢性消耗性传染病,可通过病畜传染给人类或其他动物。为控制该病的发生和流行,必须加强对牛结核病诊断学研究,以便为控制和消灭牛结核病提供技术支持。
　　 近年来,随着分子生物学技术和现代免疫学的快速发展,对于动物疾病的诊断方法也多种多样。其中,γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的免疫学检测是在特异性抗IFN-γ鼠源单克隆抗体的基础上建立。本研究利用大肠杆菌表达的牛IFN-γ(BovIFN-γ),制备抗牛IFN-γ的鼠源单克隆抗体及兔源多克隆抗体,建立可检测牛IFN-γ的双抗体夹心间接ELISA方法。
　　 以纯化的大肠杆菌表达牛γ-干扰素融合蛋白(GST-BovIFN-γ)为免疫原免疫Balb/c小鼠,进行细胞融合、间接ELISA筛选、有限稀释法克隆/亚克隆筛选分泌抗牛γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过间接ELISA对BovIFN-γ单克隆抗体效价、特异性、亚类及稳定性进行鉴定,建立理想的抗BoyIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株A12E9。
　　 利用纯化的兔多克隆抗体作为包被抗体,制备的抗BovIFN-γ单克隆抗体作为夹心抗体,以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗小鼠IgG作为酶标抗体,建立双抗夹心间接ELISA方法,检测BovIFN-γ。实验结果表明,特异性良好,不与其它检测抗原(白介素-2,MPB70,BSA,PPD)发生反应,并且,此ELISA方法的敏感性可达40ng/Ml。双抗夹心间接ELISA方法为提高牛IFN-γ检测方法的灵敏性奠定了基础。