日本血吸虫凋亡诱导因子SjAIF功能区片段的克隆及表达分析

摘要

目的 克隆表达日本血吸虫凋亡诱导因子(SjAIF)功能区片段,并对其生物学特性进行初步分析.方法 应用PCR技术扩增日本血吸虫凋亡诱导因子的功能区片段,构建原核重组表达质粒并诱导其表达,实时定量PCR分析其在不同发育时期童虫和成虫的转录水平,通过Western-blot和间接ELISA法分析重组蛋白的抗原性和免疫原性,应用免疫组化分析该蛋白在虫体内的分布情况.结果 克隆了SjAIF功能区片段,大小为831 bp.成功构建了原核重组表达质粒pET-28a(+)-SjAIF,并在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白分子量35 kD.实时定量PCR分析表明SjAIF基因在童虫和成虫的各个发育阶段均有转录,其中7 d～21 d虫体表达量较低,42 d和28 d虫体表达量较高,雌虫表达量高于雄虫.重组蛋白具有较好的抗原性和免疫原性,免疫小鼠后诱导产生了较高水平的特异性IgG抗体.该蛋白主要存在于日本血吸虫体被,少部分分布于实质组织中.结论 成功表达了SjAIF基因的功能区片段,对其生物学特性进行了初步分析,为进一步研究该基因生物学功能和作用提供了基础.