半套式RT-PCR检测动物狂犬病病毒的研究

摘要

基于我国流行的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)均属基因Ⅰ型,本研究根据GenBank公布的31株RV N基因全序列,选取保守区域设计2对引物,建立了一种检测RV的半套式聚合酶链式反应(Semi-nested RT-PCR),并对引物的灵敏性、敏感性和特异性进行检测.将该方法检测的36份新鲜脑组织样品,与荧光抗体染色法(FAT)进行比较,并将PCR结果为阳性的新鲜样品室温下放置腐败后进行检测.结果显示,该方法灵敏度检测可达到0.01 TCID50/mL.对检测呈阳性的病料进行序列分析,全部为狂犬病病毒；检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬腺病病毒(CAV)、伪狂犬病病毒(PRV)等非狂犬病病毒,结果均为阴性,表明该引物特异性较高.该方法与FAT检测结果完全一致,并能从腐败样品中检出RV,更适用于腐败样品的检测,具有快速、准确的特点,可广泛应用于广大基层狂犬病的诊断及试验研究.