单管半套式RT-PCR法检测贝类中轮状病毒的研究

摘要

轮状病毒(Rotavirus)是一种以贝类为载体的重要食源性病毒,目前来说,RT-PCR是贝类中轮状病毒最有效的检测方法,但通常由于病毒含量较低以及贝类中存在大量的PCR抑制物,致使将其运用于实际样本的检测时灵敏度仍较低.在实验室模拟自然环境,以人工播毒的方式使贝类富集轮状病毒,运用单管半套式RT-PCR法进行检测,并将单管半套式RT-PCR与ELISA、RT-PCR的检测灵敏度做了比较,表明单管半套式RT-PCR比ELISA的灵敏度高1000倍,是传统RT-PCR的10倍,有时甚至100倍.另外,单管半套式RT-PCR法降低了实验过程中的内源性和外源性污染,使检测所需时间从6h缩短至4.5h,大大改进和完善了食源性病毒检测方法.并同时以整只贝和仅以贝的消化道为样检测表明,以消化道为样时的病毒检出率和检测灵敏度较高.