鸭IL-8mRNA定量检测方法的建立及应用

摘要

为检测鸭IL-8细胞因子表达,设计鸭IL-8基因特异性引物,以鸭组织总RNA为模板,建立了鸭IL-8 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR (RRT-PCR)方法,应用该法检测了基因A型鸭甲肝病毒(Duck hepatitisAvirus genotype A,DHAV-A)弱毒疫苗免疫SPF雏鸭肝、脾和脑组织中鸭IL-8 mRNA的动态表达.结果鸭IL-8基因RRT-PCR扩增标准曲线相关系数0.993,溶解曲线呈特异性单峰,线性范围10-2～10-9,Ct值范围7.81～30.71,最低检测量99.17 copies/μL,扩增效率1.08,组内和组间变异系数范围分别为0.67％～0.94％和0.96％～1.27％;鸭IL-8 mRNA在免疫鸭肝、脾和脑组织表达水平分别在第3天、第5天和第2天时间点达峰值,分别为对照组的2.75、35.29倍和10.79倍(P＜0.01).本试验建立的鸭IL-8 RRT-PCR特异、敏感、稳定,能够快速、准确检测鸭体内IL-8细胞因子的表达水平.