淋球菌肽聚糖乙酰化对大肠杆菌溶解性转糖酶A酶切作用的影响

摘要

背景:有研究表明大肠杆菌(E.coli)肽聚糖乙酰化抑制溶解性转糖酶的酶切活性,但对淋球菌胞壁质乙酰化对该类酶的影响未见报道。目的:观察淋球菌的肽聚糖乙酰化对革兰阴性菌溶解性转糖酶家族二的酶切效果的影响。方法:运用同源重组方法敲除淋球菌的肽聚糖乙酰化基因A和B(△pacAB),制备3H标记的野生株和突变株的肽聚糖。应用分子克隆和蛋白表达纯化技术获得溶解性转糖酶A,体外测定溶解性转糖酶A对淋球菌和突变株(△pacAB)的肽聚糖酶切效果和最适酶切温度。结果与结论:溶解性转糖酶A经克隆、表达和纯化得到浓度为26.12g/mL蛋白;氚代葡糖胺标记并纯化得到氚代淋球菌肽聚糖多聚体;溶解性转糖酶A对40%乙酰化的淋球菌FA19肽聚糖酶切效果仅为9.71%,但对去乙酰化的突变株肽聚肽的酶切效果达93.45%;溶解性转糖酶对淋球菌肽聚糖酶的最佳酶反应温度为30℃。结果提示,淋球菌的肽聚糖乙酰化抑制溶解性转糖酶蛋白的切割活性,淋球菌可能通过胞壁酸乙酰化抑制溶解性转糖酶A引起的自溶的发生。