重组人骨形成蛋白2诱导成肌细胞成骨分化中的矿化反应

摘要

背景：近年来成肌细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨细胞分化已经通过多种方式得到了证实。目的：探讨成肌细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨分化过程的矿化反应及其体外诱导表达成骨表型的可行性。方法：采用差速贴壁法和酶消化法获取Wistar乳鼠成肌细胞并体外培养，纯化鉴定后取第3代培养成肌细胞加入含重组人骨形成蛋白2的培养液进行诱导，对照组不加入重组人骨形成蛋白2，体外培养21 d。结果与结论：成肌细胞经重组人骨形成蛋白2诱导后，细胞增殖减缓，相邻细胞聚集呈层状排列，诱导8 d可见胞浆有少量不透光结节，诱导14 d结节增多，21 d时胞浆内可见大量不透光结节，未经重组人骨形成蛋白2诱导的成肌细胞融合成有收缩性的肌管。诱导后的成肌细胞碱性磷酸酶活性随时间延长而增强，诱导21 d时细胞经碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色和钙结节染色均呈阳性反应。表明大鼠成肌细胞经重组人骨形成蛋白2诱导可以出现矿化反应，可在体外一定条件下诱导能够转化为成骨细胞。