重组人骨形成蛋白4和7在甲醇酵母中的高效表达

摘要

本发明涉及应用甲醇酵母高效表达人骨形成蛋白技术，尤其涉及根据酵母偏爱密码子对人骨形成蛋白成熟肽序列进行定点突变技术。其特征是用含人BMP4和7cDNA序列的质粒pBluescript KS－BMP4和pBluescript KS－BMP7为模板，PCR扩增得到人BMP4和7成熟肽cDNA序列。利用简化的重叠PCR技术分别对人BMP4和7成熟肽cDNA序列中精氨酸密码子进行定点突变。突变后的序列作为模板克隆到甲醇酵母表达质粒pPIC9K中并转化到甲醇酵母GS115内。通过筛选并获得阳性克隆。构建好的工程菌在BMGY和BMMY培养基中培养，经甲醇诱导后，高效表达重组人骨形成蛋白。本发明方法可高效表达分泌型重组人BMPs。通过定点突变，表达量提高了至少5倍，达到0.2mg/ml以上。重组人BMPs可用于骨科及相关临床治疗。