小鼠胚胎心脏心外膜细胞体外培养模型的建立

摘要

背景：胚胎心脏心外膜细胞是最近被发现的具有分化为心肌细胞和血管平滑肌细胞潜能的心脏干细胞，可分化为心脏三系细胞，为心脏损伤的再生提供了新的细胞来源，但其定向分化机制及调控因素仍不清楚。目的：体外建立小鼠胚胎心脏心外膜细胞培养模型。方法：解剖显微镜下分离11.5-12.5 d小鼠胚胎心脏，剪除肺静脉血管、心房组织及左心室，移至6孔板（或35 mm培养皿）培养，24 h后移走胚胎心脏组织继续培养。相差显微镜观察胚胎心外膜细胞生长特点；使用免疫荧光技术对细胞进行胚胎心外膜细胞特异性抗体Wt-1、Tbx18染色。结果与结论：胚胎心外膜单层细胞从组织块边缘长出，呈鹅卵石样，并围绕组织块向外延伸。移去胚胎心脏后细胞继续生长，且增殖迅速，三四天后长至融合。所有细胞均强阳性表达胚胎心脏心外膜细胞特异性抗体Wt-1及Tbx18。结果表明，胚胎心脏心外膜细胞生长迅速、形态单一，均表达心外膜细胞特异因子，细胞纯度高，成功构建了体外胚胎心脏心外膜细胞培养模型，为研究其定向分化的分子机制提供了新的思路。