小鼠脂肪来源干细胞向成骨及软骨细胞的诱导分化

摘要

背景：脂肪干细胞常从脂肪组织中分离获取，脂肪组织在全身均有分布，极易大量获得，取材时对供区损伤小。目的：进一步验证小鼠脂肪来源干细胞的体外分离、培养方法，并在特定条件下诱导其向成骨细胞和软骨细胞分化，探讨其作为组织工程种子细胞的可行性。方法：取昆明种雄性小鼠附睾处脂肪，I型胶原酶消化法和差速贴壁法获取、纯化脂肪干细胞并进行细胞表型鉴定。采用成骨诱导培养基诱导脂肪干细胞，进行钙钴法碱性磷酸酶染色和茜素红钙结节染色检测细胞分化情况；采用软骨诱导培养基诱导脂肪干细胞，进行甲苯胺蓝染色，番红O染色，Ⅱ型胶原免疫组织化学检测细胞分化情况。结果与结论：脂肪干细胞呈梭形贴壁生长，原代7-9d可达90％融合，传至第3代后细胞形态趋向一致，传代的脂肪干细胞生长曲线呈“S”形。细胞特异性抗原测定CD29、CD44表达阳性，而CD34、CD45呈阴性表达。成骨诱导分化后细胞碱性磷酸酶染色和茜素红染色呈阳性。软骨诱导分化后细胞番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色呈阳性。证实从脂肪组织中可分离到具有分化潜能的干细胞，可在体外稳定增殖传代，经诱导后可分化为成骨细胞、软骨细胞，其具有来源广泛，取材方便等优点，可成为组织工程理想的种子细胞。