过氧化氢对金属硫蛋白Ⅰ／Ⅱ敲除小鼠脾细胞的氧化应激

摘要

背景：脑缺血再灌注早期，由于脾脏中有大量炎症因子浸润引发氧化应激损伤，导致脑缺血再灌注后脾细胞出现大量凋亡。目的：观察外源性过氧化氢对金属硫蛋白Ⅰ/Ⅱ敲除小鼠脾细胞活力的影响及N-乙酰-L-半胱氨酸对过氧化氢诱导的脾细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：制备金属硫蛋白敲除小鼠脾细胞悬液，分别用不同浓度（0．1，0．2，0．5，1，2mmol／L）过氧化氢处理2h后，MTT比色法检测细胞活力。根据MTT结果选择不同浓度过氧化氢（0．5，1mmol／L）诱导脾细胞凋亡，实验分为6组：对照组、N-乙酰-L-半胱氨酸组、0．5mmol／L过氧化氢组、1mmol／L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸＋O.5mmoI／L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸＋1mmol／L过氧化氢组，2h后MTT比色法检测细胞活力，酶标仪法检测乳酸脱氢酶活力及紫外分光光度仪检测线粒体通透性转换孔的开放情况。结果与结论：随过氧化氢浓度增加脾细胞活力呈明显下降趋势（P〈0．01），且0．2，0．5，1，2mmol／L过氧化氢组脾细胞活力下降幅度最大。与对照组相比，N-乙酰-L-半胱氨酸组脾细胞活力明显提高（P〈O．01），且乳酸脱氢酶活力降低（P〈0．01），线粒体通透性转换孔开放减少（P〈0．01）；分别于0．5，1mmol／L过氧化氢组相比，N-乙酰-L-半胱氨酸＋O．5mmol／L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸＋1mmol／L过氧化氢组脾细胞活力也明显提高（P〈0．01），乳酸脱氢酶活力降低（P〈0．01），线粒体通透性转换孔开放减少（P〈0．01）。结果表明，金属硫蛋白Ⅰ/Ⅱ敲除小鼠随着过氧化氢浓度的升高，脾细胞活力逐渐下降，呈浓度依赖性，尤其对0．2，0．5，1，2mmol／L过氧化氢刺激最为敏感。N-乙酰-L-半胱氨酸使乳酸脱氢酶释放和线粒体通透性转换孔的开放减少，脾细胞活力增强，以此减轻过氧化氢诱导的金属硫蛋白Ⅰ/Ⅱ敲除鼠脾细胞的氧化应激损伤。