脐血血浆替代胎牛血清培养脐带间充质干细胞及冷冻保存

摘要

背景：采用胎牛血清扩增培养及冷冻保存的间充质干细胞，在临床应用中存在一定的风险。目的：探讨以脐血血浆替代胎牛血清体外分离培养、扩增及冷冻保存脐带间充质干细胞的可行性。方法：选择符合广州脐血库供者合格性筛选标准的脐血，收集脐血干细胞制备过程中去除的血浆，经病原学及微生物检测合格，多份混合用于细胞培养。采用酶消化法从健康足月分娩新生儿的脐带组织分离获得脐带间充质干细胞，分为两组，分别以DMEM/F12为基础培养基，添加胎牛血清或混合脐血血浆，经培养扩增后，采用流式细胞仪检测细胞免疫表型，并进行间充质干细胞成骨、成脂分化鉴定。在含有10%二甲基亚砜的DMEM/F12培养基中，分别添加体积分数为20%的胎牛血清或混合脐血血浆作为冷冻保存液，对扩增至第3代的细胞冷冻保存至6个月以上，观察复苏后细胞的活率、贴壁情况、增殖、免疫表型及向成骨细胞分化的能力。结果与结论：两种培养体系下的脐带间充质干细胞均呈现典型的梭形漩涡状生长，间充质干细胞免疫表型的表达谱系基本无差异，均具有成骨、成脂分化的能力，但脐血血浆培养条件下细胞的增殖速度显著高于胎牛血清。冻存复苏后的细胞可正常贴壁，且具有向成骨细胞分化的能力，采用脐血血浆冻存的细胞具有更高的贴壁效率及扩增能力。上述结果表明，脐血血浆可以替代胎牛血清用于脐带间充质干细胞的扩增培养及冷冻保存，并维持了间充质干细胞的基本生物学特性，是大量扩增间充质干细胞用于临床治疗较为安全的选择。