肌腱细胞与聚二甲基硅氧烷多孔材料复合培养后的玻璃化低温保存

摘要

背景：大量实验已证明,玻璃化低温保存能获得更高的细胞存活率。目的：观察玻璃化低温保存对肌腱细胞与聚二甲基硅氧烷材料复合物的影响。方法：取共培养9-14 d的肌腱细胞-聚二甲基硅氧烷复合物,分别以10%二甲亚砜、玻璃化低温保存液VS55、21%二甲亚砜进行低温保存和复苏。复苏培养1 h后,进行死/活双色荧光染色和流式细胞技术分析,观察肌腱细胞存活率,以新鲜培养的肌腱细胞-聚二甲基硅氧烷复合物为对照。结果与结论：①死/活双色荧光染色：10%二甲亚砜组肌腱细胞从聚二甲基硅氧烷支架材料孔隙表面上剥脱,呈双染的不规则细胞形态;VS55组和21%二甲亚砜组存在单染绿色荧光的梭形和球形细胞,也存在红绿双染的不规则形态细胞,两组细胞观测密度较对照组明显下降;②流式细胞技术分析：对照组细胞大小均匀;10%二甲亚砜组由于细胞量少而不足以进行流式细胞检测;VS55组以较小体积的细胞颗粒为主;21%二甲亚砜组细胞体积大小与新鲜对照组类似,同时存在较小颗粒;③细胞回收率与存活率：VS55组细胞相对存活率低于21%二甲亚砜组（64.9%,76.2%,P〈0.05）;10%二甲亚砜不能获取足够细胞,未能行细胞计数;4结果表明：采用21%二甲亚砜玻璃化低温保存有利于提高细胞的存活率,保持肌腱细胞-支架结合完整。