应用PCR快速鉴别番鸭和鹅细小病毒

摘要

根据已发表的番鸭和鹅细小病毒基因组全序列,设计并合成了1对通用引物(PC1/PC2)和1对MPV特异引物(PS1/PS2).以MPV-DNA、MPV尿囊液、MPV尿囊液和GPV尿囊液混合液、GPV-DNA、GPV尿囊液和GPV细胞培养物、DHV尿囊液和H2O为模板在同一条件下分别以2对引物进行扩增,PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示:在PC1/PC2系统中,除DHV尿囊液和H2O外,所有样品均出现长约480bp的特异核酸带,对MPV-DNA的敏感性为0.2pg,对GPV-DNA的敏感性为2pg;对MPV尿囊液的敏感性为100ELD50/2μl;PS1/PS2系统中,只有MPV-DNA、MPV尿囊液及MPV尿囊液和GPV尿囊液混合液出现预期约1100bp特异扩增产物,对MPV-DNA的敏感性为0.2ng,对MPV尿囊液的敏感性为1000ELD50/2μl,而GPV-DNA、GPV尿囊液、GPV细胞培养物、DHV尿囊液和和空白对照均未见到条带.分别以1ngMPV-DNA、1ngGPV-DNA、MPV尿囊液、GPV尿囊液、DHV尿囊液和空白对照样品进行扩增,3次重复实验结果完全一致.表明该PCR检测技术可准确、快速鉴别番鸭和鹅细小病毒,为临床上准确、快速鉴别诊断番鸭和鹅细小病毒病奠定了基础.