番鸭细小病毒

摘要： 为进一步了解番鸭细小病毒(MDPV)基因的遗传变异特征,本试验采用分段PCR扩增法获得了2个MDPV安徽分离株(AH1901和AH1902)基因组NS和VP全长基因,并与GenBank数据库中的20个水禽细小病毒基因组序列进行了比对。序列分析显示,克隆的MDPV基因均包括完整的NS和VP基因,分别为1884 bp和2199 bp,VP基因核苷酸序列变异程度相对较高,而NS基因则较为保守;进化分析显示,安徽分离株AH1901和AH1902位于同一分支,二者与国内分离的MDPV毒株ZJ-JH-2013基因遗传距离最近,可能来源于同一毒株,与MDPV疫苗株P1及国外分离毒株FM基因遗传距离则较远;安徽分离株AH1901和AH1902的NS基因序列同源性为99.8%,VP基因序列一致。两者的NS、VP基因序列与分离株ZJ-JH-2013的同源性最高,与重组型毒株SAAS-SHNH及安徽分离株AH1401同源性也在99.5%以上;与疫苗株P1、国外分离株FM同源性则较低,其中VP基因仅为88.9%、89.3%。本试验结果表明近年国内的MDPV分离株同源性均较高,但仍存在一定程度的基因变异,增加了诊断与防控该病的难度。

摘要： 为获得番鸭细小病毒(muscovy duck parvovirus,MDPV)重组结构蛋白VP2、VP3,本研究以含有MDPV YL08株VP1基因的重组载体pET-32a-VP1为PCR扩增模板,分别亚克隆VP2、VP3基因。构建了重组载体pGEX-6p-VP2、pGEX-6p-VP3并将它们转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,分别构建了重组菌株pGEX-6p-VP2/Rosetta(DE3)和pGEX-6p-VP3/Rosetta(DE3)。2种重组菌株在IPTG诱导下分别获得了重组蛋白GST-VP2和GST-VP3,分子质量分别为91、86 ku。Western blot分析结果表明,重组蛋白GST-VP2和GST-VP3可特异性结合GST-tag单克隆抗体和MDPV感染番鸭血清,免疫反应性良好。Dot-ELISA比较分析结果表明,在等质量条件下,GST-VP2的免疫反应性强于GST-VP3。

摘要： 自2015年以来,我国华东地区陆续暴发樱桃谷鸭及半番鸭以生长迟缓,短颈,短喙,舌外露,胸骨及翅、腿易发生骨折等为主要症状的疾病,研究发现引起该病的病原为鸭源新型鹅细小病毒(NGPV)。为更好地掌握该病相关知识,就该病的病原特征、流行病学、临床症状、病理剖检及诊断方法做概述,以期为该病的防治提供参考依据。

摘要： 番鸭细小病毒病是由细小病毒(MPV)引起的雏番鸭的一种急性传染病,是目前对番鸭饲养业中危害最严重的传染病之一。临床主要表现腹泻、喘气和运动障碍。番鸭细小病毒的生物学特征与小鹅瘟病毒(GPV)相似,交叉中和试验可以区分MPV和GPV。MPV能够抵抗乙醚、胰蛋白酶、酸和热等灭活因子作用,但对紫外线照射很敏感。

摘要： 本试验采用经原核表达并纯化的番鸭细小病毒VP3蛋白作为包被抗原,辛酸-硫酸铵沉淀法提取纯化制备的兔抗番鸭IgG酶标抗体作为二抗,经一系列试验,确定了间接ELISA检测番鸭细小病毒抗体的最佳抗原浓度为5μg·mL^(-1),血清的最佳稀释度为1∶100,血清样品稀释液为含10%FBS和10%脱脂奶粉的PBST,兔抗番鸭酶标抗体最适稀释度为1∶2500。将建立的方法进行了特异性、敏感性、重复性与中和试验的符合性等试验。试验结果表明,阳性血清样品作1600倍稀释还能检测到抗体;与其他常见鸭传染病的阳性血清无交叉反应;批内、批间重复性试验的变异系数小于8.7%;100份番鸭血清样品用ELISA方法与中和试验的总符合率达90%以上。说明本试验建立的检测方法敏感性高、特异性强、重复性与稳定性好,可用于番鸭细小病毒流行病学调查及鸭群免疫番鸭细小病毒疫苗后抗体监测。

摘要： 旨在探讨番鸭细小病毒(MDPV)非结构蛋白NS1与水禽真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)之间的互作关系.根据GenBank中已发表的北京鸭和浙东白鹅eEF1A1基因序列,经大肠杆菌偏爱密码子优化,人工合成的质粒分别命名为pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1;对含有MDPV YL08株NS1基因的重组质粒pUC57-NS1、pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,回收目的片段后分别插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a中,构建了重组质粒pGEX-DeEF1A1、pET-GeEF1A1、pET-NS1和pGEX-NS1;重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的表达;采用HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-DeEF1A1、HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-GeEF1A1;采用HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-NS1、HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-NS1,采用MDPV感染番鸭血清鉴定TRX-NS1和GST-NS1的抗原性;采用GST pull-down试验验证GST-DeEF1A1与TRX-NS1、GST-NS1与TRX-GeEF1A1的互作.结果表明,获得的重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的分子量分别为76.9,67.9,89.5,98.6 ku;GST-DeEF1A1和GST-NS1可与HRP标记的GST单克隆抗体特异性结合,TRX-GeEF1A1和TRX-NS1可与HRP标记的His单克隆抗体特异性结合;GST-NS1和TRX-NS1可与MDPV感染番鸭血清特异性结合,抗原性良好;GST pull-down试验中,GST-DeEF1A1可与TRX-NS1互作,GST-NS1不与TRX-GeEF1A1互作.本研究表明,MDPV NS1蛋白可以和北京鸭eEF1A1在体外相互作用而不能和浙东白鹅eEF1A1在体外相互作用,互作结果差异性可能与二者的102-106 aa,108 aa的氨基酸残基有关.

摘要： 广西合浦某番鸭养殖场的雏番鸭出现张口呼吸、拉绿色稀便、扎堆怕冷为主要症状的临床病例.本研究通过对病料样品的PCR检测,结果扩增出番鸭细小病毒(MDPV)的特异性基因片段;将阳性的病料样品接种10天龄番鸭胚,连续盲传3代后发现可致胚体出血并死亡;番鸭胚的病毒分离物经PCR检测为MDPV,证明成功分离到一株番鸭细小病毒,命名为HP20200107株.对分离病毒株结构蛋白VP基因进行扩增和序列测定,用测定的核苷酸序列与GenBank下载的MDPV参考株基因序列进行比对分析并构建遗传进化树,结果表明该分离株与国内福建省分离株P1亲缘关系最近,核苷酸相似性达99.5％.

摘要： 广东省湛江市某鸭场饲养的15日龄番鸭发病,病鸭主要表现张口呼吸、腹泻等症状,病死率达40%左右。为明确其病原,采集病死鸭肝脏、脾脏等组织进行PCR检测,病原分离鉴定,全基因组序列测定与分析,动物回归试验。结果显示,从该群病死鸭中同时分离到1株番鸭细小病毒(MDPV)与1株鸭3型腺病毒(DAdV-3),分别命名为MDPV GDZJ1901株和DAdV-3 GDZJ201901株。全基因组序列分析显示,MDPV GDZJ1901株基因组全长为5067 bp,G+C含量为45.69%,与MDPV分离株的同源性介于98.1%~99.51%,其中与MDPV分离株M8株的核苷酸同源性最高,为99.51%;对其进行遗传重组分析发现,GDZJ1901以经典MDPV YY株为骨架,在P9启动子和VP3区域经历重组。DAdV-3 GDZJ201901株基因组全长为43860 bp,含27个开放阅读框(ORF)。全基因组序列比对分析显示,GDZJ201901株与已报道的DAdV-3同源性最高,为99.89%~99.91%,且含有2个fiber基因,符合DAdV-3基因组特征。动物回归试验结果显示,新分离的MDPV和DAdV-3毒株对3日龄雏番鸭的致死率分别为28.6%和21.4%。结果表明,从同一群发病雏鸭中同时分离到MDPV和DAdV-3野毒株。

摘要： 某番鸭养殖场2周龄肉鸭发生以腹泻、呼吸困难及软脚为主要症状的疾病,鸭群整体精神沉郁,耗料量下降,结合流行病学调查、剖检病理变化等初步诊断为番鸭细小病毒(MDPV)感染.为进一步探明病因,本研究将采集的死亡鸭肝脏和胰脏组织处理后,用番鸭细小病毒、小鹅瘟等8种番鸭常见病毒特异性引物进行PCR/RT-PCR检测,结果仅番鸭细小病毒为阳性.用鸭胚从阳性样品中分离到一株病毒,命名为MDPV-GD201901株.为了解分离毒株的致病性,用分离株病毒对1、7日龄健康雏番鸭进行了致病性试验.结果显示,MDPV-GD201901株对雏番鸭具有致病性,可引发鸭只死亡和生长发育缓慢,1日龄攻毒组有20％的鸭只死亡,7日龄攻毒组有30％鸭只表现为发育迟缓.本研究为番鸭细小病毒的防控提供了一定参考依据.

摘要： 应用微量交叉中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)比较了番鸭细小病毒、鹅细小病毒和番鸭源鹅细小病毒之间的抗原相关性.结果显示:三种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;番鸭细小病毒与番鸭源鹅细小病毒、鹅细小病毒之间的R值均小于0.1;番鸭源鹅细小病毒与鹅细小病毒的R值大于0.25.结果表明了番鸭细小病毒与鹅细小病毒(番鸭源或鹅源)的抗原相关性较低,提示了番鸭源鹅细小病毒与鹅细小病毒属于同一血清型的不同亚型,研究结果为番鸭小鹅瘟病的有效防制提供了科学依据.

摘要： 本文利用建立的二重荧光定量RT-PCR方法，对广西地区鸭群收集的118份病料进行检测，结果检出鸭I型肝炎病毒2份(阳性率为1.69%)，检出番鸭细小病毒13份(阳性率为11.02%)，并未出现混合感染，检测结果与病毒分离鉴定结果一致。检测结果说明广西地区的鸭群存在鸭I型肝炎病毒的感染，并且番鸭细小病毒的感染普遍存在。

摘要： 根据GenBank上登录的鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)基因序列,分别设计合成针对GPV非结构蛋白(Ns)和MDPvNS2-VP1基因片段的2对引物GPV U／L和MDPV U／L,将GPV和MDPV提取核酸混合后作为模板,优化PCR反应条件,建立了能同时检测这2种病毒的双重PCR。特异性试验结果显示,引物GPV U/L仅特异性扩增出GPV—GZ1和GPv-GZ2株730 bp核酸片段,引物MDPVu／L仅特异性扩增出MDPV的624 bp核酸片段,双重PCR扩增出长度分别为730bp和624 bp的2条特异性片段,而扩增鸭瘟病毒(DPV)和鹅副黏病毒(GPMV)的核酸扩增结果均为阴性。敏感性试验结果显示,双重PcR能同时检测到14．4 pg的GPV核酸和28．8 pg的MDPV核酸。结果表明,建立的双重PCR可用于GP、,和MDPV的鉴别诊断和联合检测。

摘要： 本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因；其中鹅和番鸭细小病毒非结构基因(NS)全长为1884bp，编码627个氨基酸；结构基因(VP)全长为2199bp，编码732个氨基酸；序列分析表明：鹅和番鸭细小病毒NS间的核苷酸和氨基酸同源性分别为80．9％～82．9％和89．5％～91．2％，而相应的鹅细小病毒间的同源性为93．7％～99．8％和96．8％～99．7％，番鸭细小病毒间的同源性为98．8％～99．8％和98．6％～99．5％；在核苷酸和氨基酸水平上，鹅和番鸭细小病毒VP1间的同源性分别为79．7％～88．7％和85．5％～93．3％，而相应的鹅细小病毒间的同源性为88．8％～99．6％和91．5％～99．2％，番鸭细小病毒间的同源性为98．1％～99．6％和97．1％～98．8％；番鸭和鹅细小病毒NS和VP1基因的系统进化树分析表明：番鸭和鹅呼细小病毒来自共同的祖先，但随着宿主的不同而演化为不同的分支。

摘要： 将番鸭呼肠孤病毒弱毒(MDRV-CA)与番鸭细小病毒弱毒(MPV-P1)按适当比例混合，试制了MDRV-MPV二联弱毒细胞苗，并测定了二联苗各项免疫指标。结果显示：试制出的疫苗对一日龄雏番鸭具有良好的安全性和遗传稳定性；一日龄雏番鸭免疫后7天能有效抵抗MDRV强毒的攻击；同时血清中MPV-LPAI效价均大于21，21-28天抗体达高峰，有效免疫期超过60天；疫苗-200 C保存期大于12个月。上述结果表明MDRV-MPV二联弱毒细胞苗安全有效，一次免疫即可有效预防番鸭呼肠孤病毒病和番鸭细小病毒病。

摘要： 目的建立番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)的鉴别诊断方法.方法根据MDPV和GPV病毒的基因组非同源序列各设计引物MDPVF1/R1和GPVF1/R1,分别对鹅细小病毒(GPV)/番鸭细小病毒(MDPV)/鸭瘟病毒(DPV)/鸭肝炎病毒(DHV)/鸭呼肠孤病毒(REO)/犬细小病毒(CPV)/猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)的病毒培养物及核酸进行PCR扩增.结果引物MDPVF1/R1只能扩增MDPV的900 bp核酸序列,引物GPVF1/R1只能扩增GPV的465 bp的核酸序列.结论建立了GPV和MDPV的PCR鉴别诊断方法,并鉴定了两株分离病毒为GPV.

摘要： 根据Genbank上痘病毒TK基因序列分别设计左右同源臂引物TKL-F/R和TKR-F/R,以FPV基因组为模板,扩增左右同源重组臂(TKL、TKR);PCR连接左右同源臂,使中间带有多酶切位点MCS,然后连入pBluescriptⅡSK(+)骨架质粒,获得的阳性质粒命名为pTK;合成反向串联表达盒:p7.5-MCS1-SV40-MCS2-P11,将表达盒插入质粒pTK的MCS位点,筛选获得阳性质粒pTKS;在鸡痘病毒早期启动子P7.5后的MCS1处插入MDPV VP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA,从而构建MDPV VP3基因重组鸡痘病毒转移载体pTKS-VP3-EGFP,对构建好的转移载体进行酶切和测序鉴定.将转移载体pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,经RT-PCR和绿色荧光蛋白基因表达鉴定了MDPV VP3基因的表达,为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础.

摘要： 本研究以实验室试制的三批番鸭细小病毒病和小鹅瘟二联活疫苗(MPV-GPV二联活疫苗)经Hank,s液稀释成每羽份免疫剂量为1羽份、0.1羽份、0.05羽份,分别接种一日龄胶乳凝集抑制(LPAI)抗体阴性的雏番鸭,免疫后7 d采血,测定血清中MPV-LPAI和GPV-LPAI抗体效价,同时分别用MPV强毒和GPV强毒攻击,分析抗体效价与保护力的关系.结果显示:免疫鸭MPV-LPAI和GPV-LPAI效价分别达1.0 Log2和2.0 Log2以上时,即可获得有效保护,保护率达90％以上.表明LPAI抗体测定可以代替攻毒保护来评价疫苗的免疫效力.

摘要： 为构建番鸭小鹅瘟病毒感染性克隆,进行水禽细小病毒基因组结构及功能研究,根据NCBI发表的GPV B株、MDPV FM株与MDGPV PT株核苷酸序列设计并合成了MDGPV特异性引物,进而应用PCR技术分4段扩增并克隆了覆盖MDGPV全长基因组的4个片段.经过拼接与测序,将MDGPV全长DNA定向克隆到质粒pBluescriptⅡKS(+)中,获得了MDGPV PT株全长基因组DNA克隆pSK-PT1234.与MDGPV亲本PT株及NCBI登录的其他水禽细小病毒代表株序列比对发现,该克隆在NS与VP编码区间隔处存在人为引入Bsp1407 Ⅰ酶切位点.

摘要： 本发明公开了一种区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的PCR-RFLP方法，该方法是利用NS基因序列酶切位点差异来进行区别的，包括DNA的提取，PCR扩增得到NS基因片段，EcoRⅠ酶切后进行RFLP分析。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。

摘要： 本发明公开了一种一管PCR式鉴别诊断鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus，MDPV)的试剂盒，所述试剂盒包括引物、处理待检样品的试剂、PCR试剂和使用说明，其中所述引物为SEQ ID NOs：1-3。本发明的试剂盒适合鉴定鹅或番鸭动物的肝、脾和肾脏组织样品、泄殖腔棉拭子、鸭或鹅胚尿囊液以及细胞培养物样品中的GPV和MDPV。所述试剂盒在使用时包括下述步骤：(1)从待检鹅或番鸭动物获取待检样品，并对待检样品提取基因组DNA；(2)将步骤(1)获得的待检样品的基因组DNA与三种引物SEQ ID NOs：1-3一起以适量放置在一个PCR管中，进行PCR反应；和(3)电泳检测PCR产物，并根据PCR产物大小鉴别鹅细小病毒和番鸭细小病毒，其中约700bp的特异性DNA条带表示存在鹅细小病毒，约300bp的特异性DNA条带表示存在番鸭细小病毒，同时存在约700bp和约300bp的条带表示同时存在鹅细小病毒和番鸭细小病毒。

摘要： 本发明公开了一种番鸭细小病毒和鹅细小病毒的HRM鉴别方法、试剂盒和引物组，所述检测方法包括如下步骤：（1）设计一组可同时扩增番鸭细小病毒和鹅细小病毒的通用PCR引物；（2）从待测样品中提取病毒基因组DNA作为模板DNA；（3）利用步骤（1）的引物组对模板DNA进行PCR扩增；（4）对扩增产物进行HRM分析，鉴别MDPV和GPV。本发明方法：可快速、有效鉴别MDPV和GPV；检测速度快且高通量：5～10分钟即可完成96/384孔板的PCR产物检测，极大缩短了检测时间；对PCR产物无损害，检测后还可以进行后续分析，如测序和凝胶电泳等。

摘要： 本发明公开了番鸭细小病毒病和番鸭呼肠孤病毒病二联疫苗的制备及应用，该二联疫苗以番鸭细小病毒弱毒P1株(保藏编号：CCTCC V201013)和番鸭肝白点病(番鸭呼肠孤病毒病)弱毒MWCA株(保藏编号：CGMCC 0667)为种毒，分别应用番鸭胚成纤维细胞和SPF鸡胚成纤维细胞转瓶培养技术增殖病毒，收获细胞毒液，按适当比例混合后加冻干保护剂冷冻干燥，制成二联活疫苗，在流行番鸭三周病和肝白点病的番鸭养殖地区应用。

摘要： 本发明属于PCR检测领域，具体涉及一种番鸭细小病毒、鹅细小病毒和禽腺病毒4型的三重PCR检测方法，S1、根据番鸭细小病毒、鹅细小病毒和禽腺病毒4型的基因保守序列，分别设计3对特异性扩增引物；S2、提取番鸭细小病毒、鹅细小病毒和禽腺病毒4型DNA；S3、将S2中获取的所有的DNA混合后进行PCR扩增；S4、通过电泳检测S3中的PCR产物。本发明建立的三重PCR检测方法，能同时检测番鸭细小病毒、鹅细小病毒和禽腺病毒4型，三种病毒核酸模板的最低检测量分别为2pg/μL、20pg/μL和2pg/μL。

摘要： 本发明提供一种番鸭细小病毒（MDPV）和鹅细小病毒（GPV）双重实时荧光定量PCR检测引物及方法，其中，MDPV引物序列如下：上游引物P1：TAATGGTGGCAGGAATGCACAGTTC，下游引物P2：TGTTACCATGATGTCTGAAAT；GPV引物序列如下：上游引物P3：GAGGTAGACAGCAACAGAAA，下游引物P4：GCTCGTCCGTGACCATA。目前，还没有基于SYBR Green II的双重实时荧光定量PCR检测引物及方法可以同时将GPV各种基因亚型完全地和MDPV区分开来的相关研究报道和发明专利，本发明的建立可填补相关领域空白。

摘要： 本发明公开了一种番鸭细小病毒和鹅细小病毒的HRM鉴别方法、试剂盒和引物组，所述检测方法包括如下步骤：（1）设计一组可同时扩增番鸭细小病毒和鹅细小病毒的通用PCR引物；（2）从待测样品中提取病毒基因组DNA作为模板DNA；（3）利用步骤（1）的引物组对模板DNA进行PCR扩增；（4）对扩增产物进行HRM分析，鉴别MDPV和GPV。本发明方法：可快速、有效鉴别MDPV和GPV；检测速度快且高通量：5～10分钟即可完成96/384孔板的PCR产物检测，极大缩短了检测时间；对PCR产物无损害，检测后还可以进行后续分析，如测序和凝胶电泳等。

摘要： 本发明公开了一种一管PCR式鉴别诊断鹅细小病毒(Goose parvovirus，GPV)和番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus，MDPV)的试剂盒，所述试剂盒包括引物、处理待检样品的试剂、PCR试剂和使用说明，其中所述引物为SEQ ID NOs：1-3。本发明的试剂盒适合鉴定鹅或番鸭动物的肝、脾和肾脏组织样品、泄殖腔棉拭子、鸭或鹅胚尿囊液以及细胞培养物样品中的GPV和MDPV。所述试剂盒在使用时包括下述步骤：(1)从待检鹅或番鸭动物获取待检样品，并对待检样品提取基因组DNA；(2)将步骤(1)获得的待检样品的基因组DNA与三种引物SEQ ID NOs：1-3一起以适量放置在一个PCR管中，进行PCR反应；和(3)电泳检测PCR产物，并根据PCR产物大小鉴别鹅细小病毒和番鸭细小病毒，其中约700bp的特异性DNA条带表示存在鹅细小病毒，约300bp的特异性DNA条带表示存在番鸭细小病毒，同时存在约700bp和约300bp的条带表示同时存在鹅细小病毒和番鸭细小病毒。

摘要： 本发明公开了一种区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的PCR-RFLP方法，该方法是利用NS基因序列酶切位点差异来进行区别的，包括DNA的提取，PCR扩增得到NS基因片段，EcoRⅠ酶切后进行RFLP分析。本发明鉴定方法简单，效率和准确率较高。

摘要： 本发明提供了一种检测番鸭呼肠孤病毒和新型番鸭细小病毒的引物探针组合，属于畜禽疾病诊断技术领域，包括引物对和探针，所述引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述探针包括番鸭呼肠孤病毒探针和新型番鸭细小病毒探针，所述番鸭呼肠孤病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述新型番鸭细小病毒探针的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。采用本发明提供的引物探针组合能够对引起种鸭跛行的番鸭呼肠孤病毒和新型番鸭细小病毒进行快速鉴别诊断。