番鸭和鹅细小病毒PCR鉴别方法的建立

摘要

根据基因库中番鸭细小病毒(MDPV)FM株和鹅细小病毒(GPV)的B株的基因序列设计了3个引物PVC、MDPVdn、GPVdn,分别用MDPV-DNA、GPV-DNA、MDPV尿囊液、GPV尿囊液、鸭瘟病毒尿囊液、传染性喉气管炎病毒尿囊液和无离子水对照,以PVC/GPVdn和PVC/MDPVdn特异引物在同一条件下进行PCR扩增,产物经10 g/L的琼脂糖凝胶电泳分析.在PVC/GPVdn系统中,MDPV-DNA、MDPV尿囊液、DP、ILT和无离子水对照无条带,其余样品均出现约460 bp的条带,在PVC/MDPVdn系统中,只有MDPV-DNA、MDPV-GPV混合DNA、MDPV尿囊液中出现约900 bp的条带,其余无特异性核酸带,对MDPV-DNA的敏感性达0.5 pg,对MDPV尿囊液敏感性为1 000 ELD50/5 μL,对GPV-DNA的敏感性为0.5 pg,对GPV尿囊液敏感性为10 ELD50/5 μL.分别将不同时间提取0.5 ng/μL MDPV-DNA、0.5 ng/μL GPV-DNA、MDPV尿囊液、GPV尿囊液和无离子水对照样,以PVC/GPVdn和PVC/MDPVdn特异引物进行PCR扩增3次,结果稳定.表明该PCR检测技术可灵敏、快速鉴别番鸭和鹅细小病毒.